---zastosowanie-na-czym-polega-technika-pcr.jpg)
A PCR egy olyan teszt, amelyet számos betegség diagnosztizálásában alkalmaztak. A PCR-módszer lehetővé teszi a baktériumok közvetlen jelenlétének kimutatását a szervezetben, és különösen annak DNS-ét. Többek között PCR-tesztet is alkalmaznak a Lyme-kór diagnosztizálásában. Mi a PCR technika? Mi a valós idejű PCR?
Tartalomjegyzék:
- PCR (tesztelés) - mi a PCR technika?
- PCR (kutatás) - a PCR módszer alkalmazása
- PCR (kutatás) - Lyme-kór
- PCR (kutatás) - eredmények. Lehetnek hamis pozitív eredmények?
- PCR (kutatás) - eredmények. Lehetnek hamis negatívak
A PCR (polimeráz láncreakció) a genetikai és molekuláris laboratóriumokban alkalmazott alapvető módszer. 1983-ban fejlesztette ki Kara Mullis, aki 1993-ban Nobel-díjat kapott érte.
Hallja meg, mi a PCR tesztelési technika. Ez a JÓ HALLGATÁS ciklus anyaga. Podcastok tippekkel.
A videó megtekintéséhez engedélyezze a JavaScript használatát, és fontolja meg a HTML5 videót támogató webböngészőre történő frissítést
PCR (tesztelés) - mi a PCR technika?
A PCR-vizsgálat egy adott DNS-fragmens, például Borrelia fehérjéket kódoló gének többszörös amplifikációjából (általában 30-40 ciklusban), a polimeráz enzim alkalmazásával.
Ezután speciális molekuláris színezékeket használnak az amplifikált DNS-fragmens láthatóvá tételéhez. A PCR, a specifikus DNS-fragmensek amplifikációja miatt, rendkívül érzékeny módszer.
A PCR-módszerben a DNS-fragmenseket amplifikáljuk specifikus primerpárok alkalmazásával a baktérium DNS adott régiójához. Például a Lyme-kór diagnosztizálásában a PCR célterületei a fehérjéket kódoló gének, pl. 16S rDNS, recA, fla, p66, OspA.
Az a biológiai anyag, amelyből a teszt elvégezhető:
- vér
- a vándorló erythema bőrrésze
- gerincvelői folyadék
- szinoviális folyadék vagy ízületi porcból
- vizelet
PCR (kutatás) - a PCR módszer alkalmazása
A Lyme borreliosis PCR-módszerrel történő diagnosztizálása mellett lehetőség van más mikroorganizmusok vagy emberek specifikus DNS-fragmenseinek kimutatására is. Ezért a PCR-módszert a következőkben is alkalmazzák:
- vírusfertőzések diagnosztikája és monitorozása: herpeszvírusok (herpeszvírus, herpes zoster vírus, Epstein-Barr, citomegalovírus), HIV, hepatitis vírusok (HBV és HCV)
- a bakteriális fertőzések diagnosztikája és monitorozása, különösen azok a baktériumok, amelyeket nem lehet kultúrákkal azonosítani, pl. tuberkulózis
- daganatos betegségek diagnosztikája és monitorozása: leukémia, emlőrák, vastagbélrák, tüdőrák
- a rák hajlamának diagnózisa: emlő- és petefészekrák (BRCA1 és BRCA2 gének), vastagbélrák (APC és CHEK2 gének)
- genetikai betegségek diagnosztikája: hemochromatosis (HFE gén), thalassemia (HBA1 és HBA2 gének), celiakia (HLA gének)
- apasági tesztek, amelyek kimutatják a gyermek és az apa DNS-kompatibilitását
Jelenleg a PCR-módszer sok módosítást tartalmaz. Például a Lyme-kór diagnosztizálásakor főként a beágyazott PCR és a valós idejű PCR módszereit alkalmazzák. Ez utóbbi kvantitatív módszer, amely lehetővé teszi a Borrelia DNS-kópiák pontos számának meghatározását a vizsgált biológiai anyagban.
PCR (kutatás) és Lyme-kór
A Lyme-kór diagnózisának alapja a szerológiai vizsgálatok. Vannak olyan klinikai helyzetek, amelyek miatt ezek a tesztek hamis negatívak lehetnek:
- szerológiai ablak, azaz a fertőzés kezdeti periódusa, amelyben a test még nem termel specifikus IgM és IgG antitesteket a Borrelia spirochetes ellen
- immunhiányos embereknél, akik nem termelnek elegendő antitestet
- immun komplexek jelenléte, amelyek Borrelia spirochetes antigénekből és specifikus antitestekből állnak, és megakadályozzák az antitestek kimutatását szerológiai módszerekkel
Ha a Lyme-kór tünetei gyanúja merül fel a páciensben, és a szerológiai teszt eredményei negatívak, akkor PCR-módszeren alapuló molekuláris tesztek végezhetők.
A Borrelia spirochetes DNS-e kimutatható a fertőzés korai stádiumában, mert a testnedvekben a spirochéták száma ekkor a legmagasabb.
A Lyme borreliosis diagnosztizálásában elsősorban szerológiai módszereket, például ELISA-t alkalmaznak, de egyes klinikai helyzetekben a PCR-módszerrel végzett genetikai tesztek hasznosak.
Minél hosszabb idő telik el a fertőzéstől, annál kevésbé valószínű a baktérium DNS kimutatása. Ezért bizonyos esetekben a PCR-vizsgálat elvégzése előtt a baktériumokat speciális táptalajon növesztik 1-2 hétig, majd elvégzik a tesztet.
Ezt a megközelítést alkalmazzák a Lyme-kór és a betakarított cerebrospinalis folyadék gyanúja esetén. A fertőzés késői szakaszában célszerűbb ELISA tesztet végezni.
A PCR-módszert nem szabad alkalmazni a Lyme borreliosis rutin diagnosztizálásában, mivel a Borrelia burgdorferi fajták lengyelországi előfordulása tekintetében nincs szabványosítás.
A diagnózis nehézségei esetén (különösen a betegség korai szakaszában) a PCR-teszt eredménye segíti a diagnosztikai folyamatot.
A pozitív vizsgálati eredmény azt jelenti, hogy a vizsgált anyagban kimutatták a Borrelia burgdorferi DNS és fajtáinak jelenlétét, de ez nem magyarázza, hogy aktív fertőzés zajlik-e a szervezetben. Másrészt a negatív eredmény nem zárja ki a baktériumok jelenlétét a szervezetben.
Egyes laboratóriumok tesztelik a kullancsban található Borrelia DNS jelenlétét. Az ilyen vizsgálat eredménye azonban nem az alapja a megharapott személy Lyme-kórjának diagnosztizálásának.
Ajánlott cikk:
ELISA teszt - mit észlel? Hogyan olvassuk el az eredményeket? A teszt áraPCR - eredmények. Lehetnek hamis pozitív eredmények?
A PCR rendkívül érzékeny módszer, ugyanakkor nagyon érzékeny a szennyezésre. Ezért nagyon fontos a PCR-alapú tesztekben megfelelő belső kontroll kiválasztása a hamis pozitív eredmények kizárására.
A kulcs a teszteléshez szükséges anyag helyes összegyűjtése, valamint a tesztet végző diagnosztikus tapasztalata és megbízhatósága is.
PCR - eredmények. Lehetnek hamis negatívak
Mint minden laboratóriumi vizsgálatban, a PCR módszerben is, hamis negatív eredmények jelenhetnek meg. Itt kulcsfontosságú a vér összegyűjtése egy megfelelő antikoagulánshoz, mert ezek közül néhány, például a heparin, gátolhatja a PCR reakciót.
Az anyaggyűjtés az antibiotikum terápia megkezdése után a PCR reakció hatékonyságának csökkenését és a hamis negatív eredmények nagyobb valószínűségét okozhatja.
Emlékeztetni kell arra is, hogy a Borrelia baktériumok nagyon rövid ideig élnek a vérben és a testnedvekben, mert a speciális receptoroknak köszönhetően nagyon gyorsan behatolnak a test "nehezen elérhető" helyeire.
Ezért, ellentétben más mikroorganizmusok diagnosztikájával, a Borrelia spirochéták száma biológiai anyagban kicsi, néha még a PCR-módszer kimutatási határán is. Ez hamis negatívumot is okozhat.
Ajánlott cikk:
Limfocita transzformációs teszt (LTT)Irodalom
- Dunaj J. és mtsai. A PCR módszer jelentősége a Lyme borreliosis diagnosztizálásában. Tallózás Epidemiol. 2013, 67, 119 - 123.
- A kullancs által terjesztett betegségek laboratóriumi diagnosztikája. A munkacsoport ajánlásai: Országos Laboratóriumi Diagnosztikusok Kamara, Országos Közegészségügyi Intézet-Országos Higiéniai Intézet, Nemzeti tanácsadó a fertőző betegségek területén, Fertőző betegségek és neuroinfekciók osztálya, Białystoki Orvostudományi Egyetem, Lengyel Virológiai Társaság, Varsó 2014.
- Ružić-Sabljić E. és Cerar T. Haladás a Lyme-kór molekuláris diagnózisában. Mol diagnosztikus szakértő 2017. január; 17 (1): 19-30.
- Valones M.A.A. et al. A polimeráz láncreakció alapelvei és alkalmazásai az orvosi diagnosztika területén: áttekintés. Braz J Microbiol. 2009 január-márc .; 40 (1): 1-11.
---zastosowanie-na-czym-polega-technika-pcr_1.jpg)
-kiedy-go-wykona-jak-przebiega.jpg)
